בספרייה נמצאים ספרי מחקר ועיון בנושאי ההתיישבות הציונית בארץ-ישראל ובראשון-לציון מתקופת העליות הראשונות וכן יומנים וספרים המבוססים על זיכרונותיהם שלותיקי המושבה.

באוסף ספרים ארכיוניים, החל מסוף המאה ה-19: יומנים, עיתונות עברית וספרי לימוד בעברית כגון:
יומנו של זלמן דוד ליבונטין "לארץ אבותינו" (1885)
ספרו של גור גרזובסקי "בית ספר עברי" (1896)
ספרו של דוד יודילביץ "מצע ארץ-ישראל (1885)
אוסף חלקי של עתוני "האור" * "הצבי" * "השקפה"

בחלק מן הספרים הארכיונים מצויות הקדשות מעניינות, שהן בעלות אופי אישי, לאומי וראשוני. הספרייה מכילה כ-4000 כותרים. קיים גם אוסף ייחודי של תיקי נושא ותיקי אתר ובהם מבחר של חומר מצולם מתוך האוספים המנהליים והתיעודיים של הארכיון הקשורים לתולדות ראשון-לציון.

המשתמשים באוספי הארכיון מתחייבים להמציא לארכיון עותק אחד של עבודתם לאחר פרסומה. לפיכך, נמצא מגוון של עבודות מחקר בנושא ראשון-לציון, ברמה של דוקטורט, תואר מוסמך, בוגר אוניברסיטה ועבודות סמינריוניות.

חדר העיון והספרייה משרתים קהל יעד מגוון: צוות המוזיאון, חוקרים וסטודנטים, מורים ותלמידים, עובדי הרשות המקומית, אנשי תקשורת ופרסום, אמנים וסופרים, בני משפחות ותיקות וקהל רחב.
שרותי העיון בארכיון ובספרייה ניתנים ללא תשלום.